160109. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lipáz előállítására

SZABADALMI 160109 MAGTAB .NÉPKÖZTÁRSASÁG LEÍRÁS SZOLGALATITALÄLMÄNY üÉr Nemzetközi osztályozás: A Bejelentés napja: 1970. VI. 03. (GO—1138) C 07 g 7/026; 7/028 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1071. IX. 08. Megjelent: 1973. II. 28. Feltalálók: Tulajdonos: Kovácsné, Dr. Szabó Ilona gyógyszerész, 30%, Dr. Cseh György orvos. Gyógyszerkutató Intézet, 25%, Dr. Kelemen Ágnes gyógyszerész, 15%, Széli Valéria vegyészrnér- Budapest nők, 10%, Dr. Horváth János vegyész, 8%, Dr. Richter János vegyész, 4%, Tölgyesi László vegyésztechnikus, 4%, Monostori László vegyészmérnök, 4%, Budapest Eljárás lipáz előállítására i A találmány tárgya eljárás lipáz enzim előállítására ferment levekből vagy állati szervkivonatokból kicsapás, a , csapadék elkülönítése, az .elkülönített csapadékbői az enzim kivonása, majd a kivonatból az enzim kies-apása útján. A természetes zsírsavak glicerin-észtereit bontó észteráz enzimről, a lipázról ismeretes, hogy az emésztés élettani folyamatában fontos szerepet tölt be; ezen az alapon kerül alkalmazásra mint a gyógyászati emésztőenzim-készítmenyek egyik komponense. Széleskörű felhasználás alakult ki az élelmiszeriparban, továbbá kozmetikai cikkek gyártásában is. Ezek az alkalmazási területek nagy tisztaságú, az egészségre ártalmas anyagoktól mentes lipázkészítiményt igényelnek. A lipáz-«l5állítás kiindulásaként a vágóhídi hasnyálmirigy mellett egyre nagyobb szerepet kap az enzinftermelő mikroorganizmusok fermentációja. Főleg gombatörzsekről (Rhizopus, Aspergillus és Mueor fajok) ugyanis ismeretessé vált, hogy az általuk termelt lipázok tulajdonságai nemcsak megfelelnek az állati eredetű lipázéinak, hanem e lipázok bizonyos előnyökkel (stabilitás) is rendelkeznek. Mind az állati, mind a mikrobiológiai eredetű enzimek kinyerésének alapja a szervkivonatban vagy a fermentleben oldottan, de nagy hígításban levő enzim betöményítése, A jelen-2 leg ismert módszerek egy része kisózást, más része hidrofil szerves oldószerrel történő kicsapást alkalmaz a lipáz betöményítésére fermentléből vagy hasnyálmirigy kivonatból. A ki-5 sózást ammóniumszulfáttal (10 993 sz. japán szabadalmi leírás, 662 862 sz. belga szabadalmi leírás; Agr. Biol. Clhem., 33, 986 (1969); Biophys. Biochim. Acta, 23, 264 (1957), 3 262 863 sz. USA szabadalmi leírás, vagy magnéziumszulfáttal 10 fJ. Am. Chem. Soc, 55, 2 445 (1933); Biochem. J., 69, 17P (1958)] végzik. A fiermentléből kisózással nyert anyag kíméletes körülmények között megszárítható és ezzel végtermék is nyerhető (1 084 265 sz. angol szabadalmi leírás, 2 987 15 sz. japán szabadalmi leírás). Az így nyert lipáz-kószítmény azonban a hozzáadott són kívül számos szerves ballaszt anyagot, sőt a kicsapás csekély fajlagossága miatt egyéb enzimeket (proteáz, poliszaharidáz stb.) is tartalmaz, 20 ami a felhasználásnál éppúgy lehet előnyös, mint hátrányos, de a módszerek a lipázra nézve mindenképpen alacsony kitermelést biztosítanak. Megfelelő minőségű lipáz csak további műveletek (dialízis, ioncsere, szerves oldószeres 25 kicsapás, gélszűrés, kálciumfoszfátos gélkromatográfia beiktatásával biztosítható [3 262 863 Í;Z. USA szabadalmi leírás; Appl. Mikrobiol.. 17, 606 (1969); J. Biochem., 46, 575 (1959); Arch. Biochem., Biophys., 83, 309 (1959); 8647 sz. ja-30 pán szabadalmi leírás. 16Ű109