158648. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 6-aminopenicillánsav előállítására szilárd benzilpenicillin amidohidroláz alkalmazásával
MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1969. VI. 10. (BI—323) Közzététel napja: 1970. IX. 28. Megjelent: 1971. XI. 15. 158648 Nemzetközi osztályozás: C 07 d 99/20 V* * ' * "v. / .'! •* - : •• i1 \ Feltalálók: Arany Sándor vegyészmérnök, 30°/0 , Dr. Nyiri László biokémikus, 30%, Dr. Pólya Kálmán mikrobiológus, 30%, Menyhárt András vegyésztechnikus, 10%, Debrecen Tulajdonos: BIÖGAL Gyógyszergyár, Debrecen Eljárás 6-aminopenicillánsav előállítására szilárd benzilpenicillin amidohidrolaz alkalmazásával i Mint ismeretes, a benzilpenicillin fenilacetamido kötését az Escherichia coli sejtjeiben intracellulárisan található benzilpenicillin amidohidrolaz (E. C. 3J5.1.I11) enzim (D'IXON is WEBB; THE ENZYMES; Longmans Co., Lon- 5 don, 1984.) képes felbontani. A reakció ipari kivitelezése úgy történik, hogy a süllyesztett, folyékony kultúrában aerdb tenyésztéssel előállított, ép Escherichia coli NY 1/3 sejtek adott koncentrációjú vizes szuszpenzióját a benzil- io penicillin vízoldékony sóival (pl. benzilpenicillin—K, vagy benzilpenicillinnpiperidin sók) adott (célszerűen 37 C° — 40 C°) hőmérsékleten és pH tartományban (pH 7,8—8,0) hozzák össze (39.25125 sz. japán szabadalom 15 (1860.0418)], amikoris a benzilpenicillin fenilacétamido kötésének enzimatikus hidrolízise végbemegy és 6-aminopenicillánsav, valamint fenilecétsav keletkezik. (150.782 Isz. magyar szabadalmi leírás.) _ 20 A reakciórendszerbe vitt összes fenilacétamido kötés enzimatikus hidrolízisének mértékét, az addtt műveleti paraméterek betartása esetén, a sejtek benzilpenicillin amidohidrolaz 25 aktivitása határozza meg. Az Escherichia coli sejtek fermentációs úton történő előállítása során az E. coli NY 1/3 mutáns sejtjeinek benzilpenicillin amidoihidroláz enzimaktivitását azonban csak korlátozott mértékben szabályozhat- 30 juk, de bizonyos határon túl semmiképpen nem növelhetjük. Azon cél érdekében, hogy a reakciórendszerben a fenilacétamido kötés enzimatikus hidrolízis kvantitatíve menjen végbe, vagy a benzilpenicillin mennyiségét vagy az enzimhordozó sejt mennyiségét kell változtatnunk az általunk korlátozottan szabályozható, aktuálisan jelenlevő enzimaktivitás függvényében. Alacsony enzimaktivitás esetén a benzilpenicillin mennyiségének az enzimaktivitáshoz történő alkalmazásával a hidrolízis befejeztével 6-amintopieniicüláinBavra nézve híg oldatot kapunk. Amennyiben a reakciórendszerben, levő összes enzimaktivitást a sejttömeg növelésével kívánjuk fokozni, a reakciórendszert jelentős neszben (olykor 30°/<rlban) enzimihordozó siejteflikel töltjük meg. A hidrolízis befejeztével, az enzimhordozó sejteknek a reakciórendszerből szűréssel történő eltávolítása során a sejtek felületén adszorbeálódott vagy a sejtben maradt 6-aminopeniciUánsaivat is kiszűrjük, mely kitermeléscsökkenést okoz. A fenilacétamido kötés hidrolízisének kvantitatívvá tétele érdekében végzett benzilpenicillin mennyiség-csökkentés a 6—iAPS-re nézve híg oldat miatt, a sejtkoncentráció növelése pedig a sejtekkel együtt eltávolított 8—APS miatt okoz kitermelési veszteségeket. ••:•-., , 158648
