156374. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos alakú kallikrein-inaktivátor előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1967. II. 03. (FA—668) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1966. II. 23. Közzététel napja: 1969. III. 24. Megjelent: 1970. IV. 15. / ^ * VI • ii-l'i Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimái osztályozás: ./ Feltaláló: Schultz Fritz, Wuppertal-Sonnborn, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Farbenfabriken Bayer AG. cég, Leverkusen-Bayerwerk, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás kristályos alakú kallikrein-inaktivátor előállítására A kallikrein-inaktivátor egy kb. 6500 molekulasúlyú polipeptid, amelynek aminosavszekvenciája azonos a Kunitz és Nortrop féle panfcreásztripszin-inhibitoréval. Mindkét polipeptid esetében ugyanarról az anyagról van szó, amelyet az alábbiakban régebbi nevén kailikrein-inaktivátornak nevezünk. A kallikrein-inaiktivátor erős bázis. Eddig nem sikerült a kallikrein-inaktivátort kristályos alakban előállítani; csupán a kallikrein-inaktivátor ill. Kunitz-inhibitor gyengén savas pH-értéknél, magnéziumszulfáttal vagy ammóniumszulfáttal kristályosított alakban történő leválasztása volt ismeretes; vö. F. Schultz, H. Kraut és N. Bhargava, Naturwissenschaften 50, 375 (1963). Az így kapott kristályok hatélű prizmákat képeznek. E kristályok kb. 50% magnéziumszulfátot ill. ammonszulfátot tartalmaznak. Ha az ilyen kristályos termékből ki akarjuk nyerni a tiszta hatóanyagot, akkor az említett sókat előbb ismét el kell távolítani, ami csak újbóli oldás után lehetséges. A kallikrein-inaktivátor' bázisos közegtől történő kipreparálásával eddig egyáltalán nem kísérleteztek, mert azt tapasztalták, hogy az inaktivátort tartalmazó oldatok meglúgosítása csökkenti az inaktivátor stabilitását. Még a legújabb irodalomban is találunk erre vonatkoizó közléseket (vö. V. Dloulha és mtsai, Coll. 10 15 20 25 3C Czech. Chem. Comm., 30, 5. sz. 1965: „Az inhibitor az alkalikus tartományban instabil, a savas tartományban kevésbé oldódik"; hasonló megállapítások olvashatók pl. az 1084 433 és 1 011 576 sz. német szabadalmi leírásokban is); feltehetően ezekkel a tapasztalatokkal magyarázható, hogy az eddigi irodalom csak a savas közegből történő kipreparálást javasolja. Ezzel szemben meglepő módon azt találtuk, hogy a tiszta kallikrein-inaktivátor számottevő veszteség nélkül kristályosított alakban nyerhető oly módon, hogy a kallikrein-inaktivátor vizes oldatát bázis hozzáadásával vagy az anionok OH-ionukra való kicserélése útján legalább 9 pH-értékre állítjuk és adott esetben legalább 5000 KIE (kallikrein-inalktivátor-egység) koncentráció eléréséig betö/ményítjük. „Kallikrein-inaktivátor-egység (KIE) alatt a nemzetközi gyakorlatban az inaktivátor oly mennyisége értendő, amely sztandard körülmények között, tehát 15 perces inkubálás 8 pH-értéfcnél, 37 C°-on 2 KE (Kallikrein-egység) sertés-pankreasból származó kallikrein hatását 50%-ban gátolja. (A ,,'kalMkrein-egység" az a kallikrein mennyiség, amely kutyának i. v. beadva a carotis-nyomás ugyanolyan mértékű csökkenését idézi elő, mint amilyen egy legalább 50 liternyi összegyűjtött mintából vett és folyóvízzel szemben 24 óra hosszat dializált 5 ml egészséges emberi vizelettel kiváltható). A 156374