150512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B 2 és B 12 vitamintartalmú koncentrátum előállítására eremothecium ashbyi és rhizobium meliloti törzsek társított tenyészetével
Megjelent: 1963. szeptember 3U. MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL fa 150.512 SZÁM Nemzetközi osztály C 12 ÆL SA—1388 ALAPSZAM Magyar osztály: 30 h 1—8 Eljárás B2 és B12 vitamintartalmú koncentrátum előállítására Eremothecium ashbyi és Rhizobium meliloti törzsek társított tenyésztésével Feltalálók: dr. Szabó Szűcs János állatorvos, Budapest, Keresztessy Istvánná asszisztens, Budapest, Pacsay Ágoston asszisztens, Budapest A bejelentés napja: 1961. október 20. A nagyüzemi állattenyésztés terjedésével egyre több vitamint használnak fel a mezőgazdaságban. Ezek közül a B2 vitamint többnyire, a B12 vitamint kizárólag mikrobiológiai úton állítják elő. A B2 vitamint (Riboflavin t) az Eremothecium ashbyi, a B12 vitamint (Cianokobalamint) pedig többek között a Rhizóbium meliloti törzs termeli. Irodalmi adatok alapján fermentorokban a B2 vitamin koncentrációja mi-ként 500—3000 gamma között, a B12 vitamin koncentrációja pedig 3—10 gamma között változik. A két vitaminféleségnek a termelő törzsek társított tenyésztésével történő, egyidejű előállítására nincsen adat az irodalomban. Az ipari mikrobiológia általános törekvése a termelvények árának csökkentése. Ennek legáltalánosabb módjai a következők: Nagyobb aktivitású törzsek szelektálása ill. a táptalaj célszerű (olcsóbb anyagok, prekurzorok adagolása) módosítása. A harmadik, eddig még nem kidolgozott eljárás a fermentációs táptalaj többirányú kihasználása. Mi ezt az utóbbit választottuk. A kitűzött cél eléréséhez részben olyan Eremothecium ashbyi törzset kellett előállítani, amely a B12 vitamin szintetizálásához nélkülözhetetlen anyagok (vas, kobalt, stb.) jelenlétében is aktív); részben pedig a B,2 vitamint termelő Rhizóbium melilotii törzset kellett az Eremothecium tenyészetben meglevő viszonyokhoz (magasabb széndioxid'tartalom, más fehérje és szénhidrát forrás stb.) adaptálni. Mivel az Eremothecium ashbyi törzs vasérzékeny, a B12 termeléshez pedig vas és egyéb fém ionok jelenléte is szükséges, szelektálással és adaptálással az egyik variánst fokozatosan vas, és kobalt tűrővé alakítottuk, úgy, hogy a törzset az előbbi anyagokat mind nagyobb koncentrációban tartalmazó táptalajon szaporítottuk el. Az így nyert X| variáns telepei laposak, nem fénylők és igen kifejezetten sárga színűek, sőt a táptalajt is erősen megsárgítják, ugyanakkor vas és kobalt jelenlétében is jól termelnek. A variánst az Országos Közegészségügyi Intézetnél 620 719.2. számon letétbe helyeztük. A B12 termelést veszélyeztető phagfertőzés miatt a Rhizobium melilotii törzs szélesztése és besugárzása útján nyert egyik variánst bizonyos rhizobium- fák iránt rezisztenssé alakítottuk és a _ légköri viszonyoknál több széndioxidot tartalmazó közeghez adaptáltuk. Ezután sorozatos passzálással elértük, hogy glukózét és malátakivonatot tartalmazó táptalajban is annyi B12 vitamint termelt, mint a csak glukózét tartalmazó táptalajban. Az Eremothecium ashbyi törzset a B2 vitamin szintézisét is hátrányosan befolyásoló fertőzések kiküszöbölése végett általában antibiotikumokat is tartalmazó táptalajban szaporítják. A fentiek szerint izolált, de antibiotikum érzékeny, Rhizobium melilotii variánst tehát streptomycin és penicillin rezisztenssé kellett alakítani. Ezt fokozatos adaptálással értük el. A rezisztens törzs 40 gamma/ml streptomycin és 50 E/ml penicillin jelenlétében is jól szaporodott, de B12 termelőképessége csökkent. További szelekcióval a fenti szempontúik szerint izolált, mosmár antibiotikum rezisztens rhizobium variánsok között találtunk olyan törzset, amelynek Bi2 termelőképessége megfelelt az eredeti (szülő) törzs B12 termelőképességének, és amelyet 620 719.1. számon az Országos Közegészségügyi Intézetnél deponáltunk. Az Eremothecium ashbyi és a Rhizobium meli lotii törzsek tenyésztési feltételeit vizsgálva azt találtuk, hogy a tenyészetek kezdeti és végső pH- értéke, valamint az optimális hőmérséklet azonos
