150244. lajstromszámú szabadalom • Eljárás delta4-3-ketoszteroidok mikrobiológiai dehidrogénezésének optimális kivitelezésére
Megjelent: 1963. május 31. MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL 150.244 SZÁM Nemzetközi osztály: GO—823. ALAPSZÁM Magyar osztály: C—07—es 12—0-25 SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Eljárás /J 4 -3-ketoszteroidok mikrobiológiai dehidrogénezésének optimális ' kivitelezésére Gyógyszeripari Kutató Intézet, Budapest Feltalálók: Mizsei Antal gyógyszerész. (50%), Szabó Antal vegyészmérnök (5(1%) A bejelentés napja: 1961. augusztus 16. Ismeretes, hogy a megfelelő z14 -3-k.etcszteroidokból mikro1 biológiai úton igen hatékony /1'>4 -3--ketoszteroidok állíthatók elő. így pl. hidrokortizonból prednizolon, rnetilte.sztoszter önből 1-dehidrometiltesztoszteron, stb. Ezen vegyületeknek mikrobiológiai úton történő előállítása optimális módon csak abban, az esetben biztosítható, ha rendelkezésre áll olyan módszer, amely az átalakítás mértékéről a fermentációs folyamat alatt kvantitatív képet nyújt a szteroidok koncentrációviszonyait illetően. Olyan speciális eljárásra van tehát szükség, amely a fermentációs közegből vagy a szubsztrátum vagy az átalakított szteroid, vagy mindkettő mennyiségének gyors és pontos meghatározására alkalma«. Ilyen módszer hiányában az átalakítás jó termeléssel és gazdaságosan nem végezhető. Evans, K. és Gillam, A. E. (J. Chem. Soc. 565 [1943]) spektrofotometriás vizsgálatokat végeztek különböző — karbon il csoportot tartalmazó — vegyületek, ill. azok tioszemikarbazonjaira vonatkozóan, Forist, A. A. (Anal. Chem. 31, 913 [19591) — az előbbire alapozva — módszert dolgozott ki ZJ4-3-ketoszteroid szennyezés meghatározására A' '4 -3-ketoszteroid készítményekből. Ezen szerzők vizsgálataikat analitikai, ill. gyógyászati tisztaságú vegyületekkel végezték. Olyan módszer, amely alkalmas lenne fermentációs közegből történő /l4-3-ketoszteroidok, ill. /J'^-S-ketostzeroidok koncentrációjának meghatározására tioszemikarbazon képzési reakcióval, ill. spektrofotometriás méréssel, és a megkívánt gyorsasági és pontossági követeményeknek eleget tenne, sem irodalmi közlemenyből, sem szabadalmi • leírásokból mind ez ideig nem ismeretes. Találmányunk olyan eljárás, mely alkalmas arra, hogy fermentációs folyadékból a szubsztrátum, ill. az előállítandó termák koncentrációját az átalakítás alatt sűrű időközökben kvantitatíve értékelje, amelynek alapján a fermentációs oxidációs folyamat a legelőnyösebb időpontban — a maximális termelésnél — állítható le. A szabadalom szerinti eljárás egyik változata szerint a fermentációs folyadék szteroid-tartalmát vízzel korlátoltan elegyedő oldószerrel, célszerűen kloroformmal extraháljuk. A bepárlással kapott szteroidkeveréket tartalmazó kivonat alkoholos oldatából a szubsztrátum {/!4 -3-keíoszteroid) mennyiségét határozzuk meg úgy, hogy megfelelő töménységű sósavas tioszemikarbaziddal 0 C°-on 30 percen keresztül, a fenti vegyület tioszemikarbazon ját képezzük (a megadott körülmények között a zl'>4 -3-ketoszteroid reakciója háttérbe szorul), majd az így kapott reakciótermébre jellemző abszorpciós maximumon ( /-= 302 m,u) történő spektrofotometriás mérésén keresztül a koncentrációt előzetesen elkészített standard görbe segítségével kiértékeljük. Azt, hogy a szobahőfokon örténő spektrofotometriás mérés alatt a A1 > 4 -3-ketoszte.roid reakcióját háttérbe szorítsuk a pH növelésével érjük el, puffer anyagokkal. A szabadalom szerinti eljárás másik változata szerint a fermentációs folyadék szteroidtartaimát kloroformmal extraháljuk. A bepárolt, szteroidkeveréket tartalmazó kivonat alkoholos oldatából mind a kiindulási vegyület (szubsztrátum), mind
