149878. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászatilag értékes szteránvázas glükozidokat tartalmazó növények tőszelekciójára a hatóanyag tartalom fokozása céljából
Megjelent: 1962. december 31. MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG •0T ^> SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL 149.878 SZÁM FE—521. ALAPSZÁM Nemzetközi osztály: A—01—g Magyar osztály: 45 f 5—6 12 o 25 Eljárás gyógyászatilag értékes szteránvázas glükozidokat tartalmazó növények tőszelekciójára a hatóanyag tartalom fokozása céljából Dr. Ferenczy Lajos tudományos munkatárs, Szeged A bejelentés napja: 1961. május 2. A szteránvázas glükozidokat (alkaloidokat és szaponinokat) tartalmazó növényfajok nemesítésének, ezáltal a hatóanyag tartalom fokozásának jelentős akadálya volt, hogy nem rendelkeztünk gyors tőszelekciós eljárással, mellyel a magas hatóanyag tartalmú egyedeket sikerült volna továbbszaporításra kiválogatni. Még a megbízható kvantitatív kémiai eljárás (Szász—Gracza—Lőrinc: Acta Pharm. Hung., 31, 211—214, 1960) is nehezen alkalmazható jelentős munka- és időigényessége miatt. A találmány azon alapszik, hogy bizonyos gombafajok szaporodását a szteránvázas glükozidok gátolni képesek; a gátlás mértéke arányos a növény által tartalmazott hatóanyag koncentrációjával. Az egyes növényegyedek azonos életkorú leveleiből présnedvet nyerve vagy kivonatot készítve, annak meghatározott mennyiségét azonos nagyságú papírkorongokra visszük, majd ráhelyezzük a teszt-gombával beoltott táptalajra. Az inkubáció után megmérjük a létrejött gátlási zóna átmérőjét. Továbbszaporításra azokat a növényegyedeket válogatjuk ki, melyek présnedve vagy kivonata viszonylag a legnagyobb gátlási zónát hozta létre, tehát azokat a növényegyedeket, melyek a legtöbb hatóanyagot tartalmazzák. Az eljárás gyors, érzékeny, jól reprodukálható és olcsó. Kétdolgozó 100 növényegyedet képes megvizsgálni naponta. A módszer standard hibája alacsonv, s = +0,5. Példa: Elkészítjük a következő összetételű táptalajt: MgS04 .7H 2 0 saccharóz élesztő agar-agar 0,5 20,0 0,5 20,0 deszt. víz 1000 ml KH2 P0 4 3.449 g Na2 HP0 4 .2H,0 7,363 g (NH4 ) 2 SO, 5,0 g ezt 1/2 atmoszféra túlnyomáson 10 percig autoklávban sterilizáljuk, majd az autoklávozás után a még forró táptalajba bemérünk 5 mg oxitetraciklin-HCl-t, s a táptalajt Petri-csészékbe öntjük. 10 cm átmérőjű csészékkel dolgozunk, egy-egy csészébe 25 ml táptalajt öntünk. A Syncephalastrum racemosum nevű gombafaj :— mely különösen érzékenynek és egyben technikailag is igen jól alkalmazhatónak bizonyult — konidiumainak oltókacsnyi mennyiségét 10 ml csapvízben szuszpendáljuk. A táptalaj megszilárdulása után a felületre rávisszük a konidium szuszpenziót, a felesleget eltávolítjuk, s a táptalaj felületét megszáradni hagyjuk. Azonos fejlettségű növényegyedekről (a céltól függően pl. Solanum aviculare-ról vagy egyéb fajok egyedeiről, melyek szteránvázas glükoalkaloidokat vagy szteroid szaponinokat tartalmaznak) azonos korú leveleket szedünk, esőmentes napon, reggel 7 és 8 óra között, 2—4 g mennyiségben. A levelekből szorító préssel sejtnedvet nyomunk ki, majd ebből (Hagedorn pipettával) 0,05 ml-t viszünk egy-egy 10 mm átmérőjű papírkorongra. A papírkorongokat a táptalaj felületére helyezzük, egymástól kb. 3 cm távolságra. A csészéket ezután 24 órás inkubációs időre 30 C°-os termosztátba tesszük. Az inkubációs idő eltelte után megmérjük a gátlási zónák átmérőjét. Azokat a növényegyedeket válogatjuk ki továbbszaporításra, melyek kivonata a legnagyobb zónát hozta létre.
