149186. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tetraciklin előállítására
Megjelent: 1962. március 31. MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL 149.186. SZÄM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — Cl—280. ALAPSZÁM SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Eljárás tetraciklin előállítására CHINOIN Gyógyszer- és Vegyészeti Termékek Gyára, Budapest Feltalálók: Dr. Darvas Jenő orvos, Gócza László vegyész, Járai Miklós mikrobiológus és Kollár Gyula vegyész, budapesti lakosok A bejelentés napja: 1958. július 24. A tetraciklin, teljes nevén 4-dimetilamino-l,4,-4a,5,5a,6,11,12a-oktahidro-3,6,10,12,12a-pentahidroxi-6-metil-l,-ll-dioxo-2-naftacénkarboxamid, előállítása kémiai, vagy fermentációs úton történhet. A kémiai eljárások klórtetraciklin (U. S. P. 2 699 054), ül. brómtetraciklki (Brit. 787 791) reduktív dehalogénezésével állítják elő a tetraciklint. A fermentációs úton történő eljárásokon belül jellegük szerint több csoportot különböztethetünk meg: a) Streptotnyces aureofaciens-sel (vagy egyéb eredetileg klórtetraeiklint termelő törzzsel) történő tetraciklin termelés, melyen belül ismét két eset lehetséges: «) A klórozás kompetetív gátlása nagy koncentrációiban adagolt halogenid homológokkal. (U. S. 2 739 924; Brit. 782 125). ß) Kloridimentes táptalajon történő fermentálás. (Brit. 773 453; 775 115; 781843). b) Űj mikroorganizmussal történő tetraciklin termelés. (Brit. 770 065; 775 139). Jelen eljárás tárgya új mesterséges módszerekkel előállított Sreptomyces aureofaciens mutans törzzsel történő tetraciklin termelés. Különböző mutáción alapuló eljárások régóta ismeretesek már más területen és más célból (p. U. S. 2 571 693 a streptomycintermelés javítására irányul), azonban ezek alapvetően különböznek két vonatkozásban az általunk alkalmazott módszertől, mégpedig: 1. Egy már meglevő tulajdonság javítására irányulnak. 2. A cél elérése teljesen véletlentől függ, gyakorlatilag: a siker szerencsés szelekción alapszik. Vizsgálataink során megállapítottuk, hogy a klórozó mechanizmus kiiktatásával kellő időben kombinált erélyes mutagen behatással olyan mutánst lehet előállítani az eredeti klórtetraciklint termelő Streptomyces aureofaciens törzsből, amelynél az antibiotikum termelés egyensúlya nagymértékben eltolódik a tetraciklin termelés irányában. Ezt a hatást több ízben sikeresen reprodukálni lehetett, azonban komoly problémát jelentett, hogy az új tulajdonság kifejlődése mellett az összantibiotikum termelés jelentékenyen csökkent. Kísérleteinket a továbbiakban arra irányítottuk, hogy a klórozó mechanizmus tartós kiiktatását összhangba tudjuk hozni az antibiotikumszint emelésével. Megfelelő sorrendben alkalmazott mutagen behatással és a tetraciklin molekula bioszintetikus karakterének szem előtt tartásával eszközölt speciális kezeléssel, melyet az alábbiakban ismertetni fogunk, olyan mutánshoz jutottunk, amely 90% felett termel tetraciklint, ezt a tulajdonságát örökletesen több generáción át kloridos táptalajon is megtartja s összantibiotikum termelése köziéi kétszerese az eredeti Streptomyces aureofeciens törzsének. A következő diagramban ismertetjük az új törzs geneológiáját:
