147773. lajstromszámú szabadalom • folyamatos eljárás B12-vitamin fermentációs előállítására

f Megjelent 1960. november 30-án ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 147.773. SZÁM 30. h. 1-8. OSZTÁLY — Cl—309. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY , Folyamatos eljárás Bi2-vitamin fermentációs előállítására CHÍNOIN Gyógyszer- és Vegyészeti Termékek Gyára, Budapest Feltalálók: dr. Simon Ágoston orvos és Varga Ferenc technikus, mindketten Budapest A bejelentés napja: 1959. szeptember 21. Számos dolgozat ill. szabadalom foglalkozik Bi2-vitamin előállításával Propionibacterium ireundenreichii, vagy Propionibacterium shermsnii segítségével (Ind. Eng. Chem. 44. 2651—2655. gric. Chem. Soc. Jap. 28. (1954), No. 2., 111—114, Acta Biochim. Polon. 1. (1954) 308—311, USP. 2,753.289, USP. 2,715,602, USP. 2,816,856, 143.834 sz. magyar szab. stb.). Ezeknek a dolgozatoknak ill. szabadalmiaknak az a közös vonása, hogy az általuk leírt eljárásoknál a Propionibacteriumoí egyedül, vagy tej savas baktériumokkal szimbiózisban, de minden esetben steril körülmények között tenyésztik, mintegy 6—10% inokulum alkalmazása mellett. Ez természetesnek is látszik, minthogy a Propionibaktériumok a lassan szaporodó baktériumok közé tartoznak, amelyek különösen a fermentáció kezdeti időszakában lassan fejlődnek és ezért más, gyorsabban szaporodó baktériumok igen könnyen túlnövik őket. A fermentáció későbbi szakában az várható, hogy a savtermelés bizonyos relatív védelmet nyújt fertőzések ellen, ez az alacsony pH nyújtotta védelem azonban csak viszonylagos, mert hiszen a vaj savas baktériumok és sok egyéb baktérium is jól tenyészik savanyú közegben. Ezenkívül az antibiotikum-ipar általános tapasztalata az, hogy még a legszélesebb spektrumú antibiotikumokat is csak steril körülmények között lehet előállítani, mert mindig előfordulnak, ill. kitenyésznek olyan ellenálló mikroorganizmusok, amelyek a fermentációt könnyen befertőzik. Kivételt képez a klórtetraciklin, amely egyes csehszlovák szerzők szerint nem steril körülmények között is előállítható (Chem.. zvesti 12. (1958) 121—127). Itt azonban a fermentációs idő igen rövid, az antibiotikumokat előállító mikroorganizmus növekedése igen gyors és ezért idegen baktériumok elszaporodására nincs idő, ha elég nagy mennyiségű steril inokulumot adnak a nem-steril táptalajhoz. Ismeretesek ipari fermentációk, amelyeket általában nem-steril körülmények között vezetnek le: így pl. a szeszes vagy az aceton-butanolos fermentációk, amelyekre az jellemző, hogy igen gyors növekedésű mikroorganizmusokkal végzik azokat, amelyek 1 : 10 arányú inokulum esetén olyan gyorsan nőnek, hogy idegen mikroorganizmusok elszaporodására gyakorlatilag ritkán kerül sor. Ismeretes olyan ipari fermentáció (tejsavval), amelynél az erjesztő mikroorganizmus termofil sajátossága és az ennek folytán alkalmazható magas hőmérséklet, gyakorlatilag kizárja a fertőzés lehetőségét. Végül ismeretesek olyan ipari fermentációk, amelyeket nem tiszta tenyészettel, hanem kevert baktériumflórával végeznek — olyan baktériumflórával, mely fertőzéssel szemben az adott körülmények között kevéssé érzékeny (pl. silózás, metanobakteres Bi2-vitamin erjesztés stb.). Az ilyen fermentációknál a sterilitás betartása felesleges. A propionibaktériumos fermentáció természetesen gyökeresen különbözik az említett kategóriák mindegyikétől, mert itt egy hangsúlyozottan lassan fejlődő és szaporodó, fertőzésre a fermentáció első szakában igen kényes mikroorganizmusról van szó, amellyel a szó köznapi értelmében vett nem-steril tenyésztést mindeddig nem valósították meg. Azt találtuk, hogy Br;vitamin igen előnyös és gazdaságos módon állítható elő a Propionibacterium-családhoz tartozó mikroorganizmusokkal való fermentálás útján, ha a fermentlé mennyiségére számított legalább 25% steril inokulummal való beoltás után folyamatosan vagy félfolyamatosan fermentálunk nemsteril körülmények között. Az ilyen módon fermentált törzs gyakorlatilag nem fertőződik be számottevő mértékben és ez a magyarázata annak, hogy a termelési értékek semmivel sem maradnak el az egyébként hasonló körülmények közt végzett, de steril fermentációknál elért eredménytől.