147125. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az élesztő tenyészetek ergoszterin tartalmának növelésére
Megjelent: 1960. július 1. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 147.125. SZÁM 30. h. 1—8. és 6. a. 14—23. OSZTÁLY — KO—1283. ALAPSZÁM Eljárás az élesztő tenyészetek ergoszterin tartalmának növelésére Dr. Konsanszky Antal egyetemi tanársegéd, Szeged és Fazekas Árpád orvostanhallgató, Szeged A bejelentés napja: 1958. április 23. Az ergoszterin számos gyógyszer (vitaminok, hormonok) kiindulási alapanyagát képezi. Gyógyszergyártás céljaira általában állati eredetű szterinből készítik, vagy növényi eredetű olyan anyagok feldolgozásából nyerik, amelyek viszonylag magas koncentrációban tartalmazzák, vagy egysejtű mikroorganizmusokból (élesztőből) állítják elő. Ipari előállításra az élesztőből történő kinyerés a legalkalmasabb. Ezért számos próbálkozás történt már az élesztők ergoszterintartalmának növelésére. Ismeretes a természetben előforduló élesztők mikrobiológiai úton való szelektálása és a magas ergoszterintartalmú fajták gyűjtése a nagyobb kinyerés céljából. Ismert eljárás, amikor a tápoldatba 2—3% ascorbinsavat adnak, vagy a tenyészet redoxpotenciálját csökkentő thyoglikolsavat alkalmazva az ergoszterintartalom emelkedik, de ugyanakkor az élesztő szárazanyag mennyisége a nem kezekhez képest csökken, ezért a százalékosan kimutatott növekedés értéke csak látszólagos. Ismeretes továbbá a 629 415 sz. német szabadalmi eljárás is, melynek lényege az, hogy nádcukor/agar, vagy sörcefre/agar tápoldatokban szuszpendálja az ergoszterinben dúsítandó élesztőt és ezt 1 mm rétegvastagságban petri csészékben helyezi el, 23— 30 C°-on inkubálja, és periodikusan alkoholgőzlevegő gázkeveréket bocsát a kultúrára bizonyos ideig. E kezelés hatására az er goszt éri ntartalom nem ritkán 40-szeresére is emelkedik. Ezen ismert eljárás igen komoly hátránya: rendkívül körülményes kivitelezhetősége, ezért üzemi megvalósításra teljesen alkalmatlan. Ezenkívül ismeretes a 126 017 sz. magyar szabadalom is, amelynek lényege az, hogy az élesztőt glicerines erjedésnek veti alá, mégpedig kétszer egymás után. Először kb. 11% cukortartalmú tápoldatban történik az erjesztés, amelynek során 5—6 g/kg az élesztő szárazanyagára vonatkoztatott ergoszterin növekedés, mig a kiindulási élesztőé 1—1,2 g/kg. A második szakaszban úgy járnak el, hogy az előző erjesztéssel kimerült él észt őszuszpenzi óihoz további kb. 1%-nyi cukrot adagolnak rövid idő alatt folyamatosan. Ilyen módon elérik azt, hogy az ergoszterin 8—10 g/kg-ra dúsul fel. A találmány szerinti eljárás lényege az, hogy az ergoszterintermelés során egyrészt növényi eredetű porfirin vegyület alkalmazásával avatkozunk be a sejt anyagcsere folyamataiba, másrészt a tenyészet szellőztetéséül kb. fél térfogatának megfelelő levegő által O2 hiány jön létre, ami az ergoszterin szintézisét és az élesztő mennyiségét egyaránt növeli. A találmány szerinti eljárással bármilyen szterin %-tartalmú élesztő ergoszterintartalma 13—14 g/kg-ra emelkedik. Az ergoszterintartalom növelésére szükséges tápoldat vezetéki vízben oldva glukózét, vagy szaccharozét tartalmaz. E tápoldatban szuszpendáljuk az élesztőt, majd vízoldékony növényi eredetű porfirin vegyületet teszünk hozzá. Ezután 30 C°-on több napon keresztül kb. fél térfogatának megfelelő levegőt áramoltatunk át percenként. Inkubálás után az élesztőt útépítéssel elkülönítjük, vezetéki vízzel mossuk, majd NaOH-al és egyidejű hőkezeléssel történő feltárás után petroléterrel extraháljuk. Egy példaképpen! előállítás a következő: 9% glukózét, vagy szaccharozét tartalmazó vezetéki vízzel készült tápoldatba 3% pékélesztőt szuszpendálunk. A szuszpenzióba porfirin vegyületet pl. Na-klorofillint adagolunk 25 mg/liter — 0,5 g/liter közötti mennyiségben, célszerűen 0,25 g/litert. Az így készített tenyészetet 30 C -ra termosztált fülkébe helyezzük és a tenyészet fél térfogatának megfelelő levegővel szellőztetjük percenként 96 órán keresztül. A tenyésztési idő után az élesztőt kiülepítjük, vezetéki vízzel ismételten mossuk, majd 5%-os NaOH-val és egyidejű hővel (120 C°, 1 órán át) feltárjuk és az ergoszterint petroléterrel történő ismételt extrakcióval kivonjuk. Az ergoszterin mennyiségét a Liebermann — Burchard színreakció alapján fotometrikusan határozhatjuk meg. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás élesztő tenyészetek ergoszterintartalmának növelésére, azzal jellemezve, hogy az élesztőt tartalmazó tápoldathoz 25 mg/1—0.5 g/1 között:
