146875. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására

Megjelent: 1960. május 31. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 146.875. SZÁM 12. p. 11—17. OSZTÁLY ~ GO—627. ALAPSZÁM SZOLGALATI TALÁLMÁNY Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására Gyógyszeripari Kutató Intézet, Budapest Feltalálók: Dr. Wix György (80%) és Albrecht Károly 20(°/o) A bejelentés napja: 1958. június 5. Szteroidok mikrobiológiai oxidációjánál a várt hasznos termék általában közbeeső termékek, melyek a mikroorganizmusok hatására tovább alakulnak nem kívánatos végtermékekké. A kívánt terniékeknek jó hozammal való kinyerése sok tényezőtől függ. Tekintettel arra, hogy a szteroidok drága alapanyagok, különösen fontos, hogy a kívánt terméket jó hozammal tudjuk elkülöníteni. A találmány eljárás, mellyel szteroidok mikrobiológiai oxidálását jól tudjuk irányítani és a kívánt terméket jó hozammal és tiszta állapotban kapjuk. A találmány alapját az a felismerés képezi, hogy az oxidáló mikroorganizmusok micéliuma az oxidálandó szteroidot adszorbeálja és az oxidált szteroid mint anyagcsere-termék a folyadékba jut. Ha tehát a folyadékot a micéliumra visszavezetve keringtetjük, az oxidált termék a folyadékban feldúsul. A hasznos termékben feldúsult folyadékot optimális koncentráció mellett elvezetve jó hozammal kaphatjuk a kívánt szteroid származékot, A találmány tehát eljárás szteroidok oxidálására fonalas gombákkal folyadékban, oxigén jelenlétében, melynél a mechanikus eszközökkel meghatározott tériben tartott mikroorganizmus tömegen vezetjük át az oxigéntartalmú folyadékot és a mikroorganizmusokról elvezetett folyadékból az oxidált szteroidot elkülönítjük. Tekintettel arra, hogy a fermentátum a micélium^tömeg miatt kocsonyás jellegű, a gyakorlatban csak nehézségek árán érhető el, hogy a mikroorganizmusokon keresztül áramoltassuk a folyadékot. Ezért a találmány értelmében, továbbá pellet alakban (gyöngy alakban) tenyésztett mikroorganizmus ágyat használunk, amikor is a folyadékárammal szemben a 'mikroorganizmusokat meghatározott térben szűrőfelülettel tartjuk vissza. Kísérleteink során úgy találtuk, hogy a mikroorganizmusok, különösen pedig a pellet alakban tenyésztett organizmusok aránylag nagy mennyiségű szteroidot adszorbeálnak, úgyhogy az oxidált szteroid elkülönítése céljából elvezetett folyadék pótlására adagolhatunk szteroidmentes táptalajt is. Az elvezetett fermentlevet azonban pótolhatjuk tiszta vízzel is, amikor az oxidált szteroidot igen nagy tisztaságban nyerhetjük ki az eljárás folyamán elvezetett folyadékból. Az elvezetett fermentátum pótlására betáplált táptalajba vagy vízbe természetesen adagolhatunk további szteroidmennyiségeket is. Víz helyett továbbá alkalmazható a biokémiában használatos bármilyen más Eiziológiás közeg. 1. példa: 5 liter 2% glukózt, 2% kukoricalekvárt, 0,1% nátriumkloridot tartalmazó, pH 4,5-es 121c

-on 30-ig sterilizált táptalajt beoltottunk 1,6 xlO5 RhizopuiS nigricans spórával. A fermentoert 28°-on két napig levegőztettük és kevertettük. A kapott pellet alakú növekedést mutató tenyészetből 400 ml-t helyeztünk el 4 cm 0-jű kromatografáló oszlopban (1. ábra, 1.). Az alsó négyágú elosztón (4) keresztül a közlekedőedények törvénye értelmében az oszlop mellett elhelyezett és hajlított végével az oszlopba benyúló üvegcsőben felfut a folyadék. A 6-os jelű kapillárison át levegőt fújatunk be, ez folyamatosan beemeli az 5-ös jelű üvegcsőből az oszlopba a fermentlét, miközben levegővel is telíti. A keringő folyadékhoz 4 ml acetonban feloldva 160 mg progeszteront adtunk. A levegő- és (5 lit/pere) folyadékáramoltatás (75 ml/perc) megindítása után 6., 8., 10., 12,, 14. órában 250 ml felülúszót engedtünk le az alsó szorítón (7) keresztül és mindig azonos mennyiségű friss ferment-