144229. lajstromszámú szabadalom • Eljárás injekciókra alkalmas tisztaságú ACTH készítmény előállítására
Megjelent: 1958. szeptember 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 144.229. SZÁM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — GO-457. ALAPSZÁM Eljárás injekciókra alkalmas tisztaságú ACTH készítmény előállítására A magyar állam, mint a Gyógyszeripari Kutat ó Intézet (Budapest) jogutódja Feltalálók: Dr, Gyermek László kutató orvos (48%)* Dr. Fekete György kutató orvos (32%) és Dr. Lázár Gergelyné tudományos kutató (20%). Bejelentés napja: 1955. augusztus 6. A nyers ACTH készítmény szennyezéseket tartalmaz, melyek nemkívánatos gyógyászati mellékhatásokkal rendelkeznek. így a hátsólebeny szennyezés és az anafilaxiás szennyezés igen káros, úgyhogy azokat az injekciókra alkalmazott készítményekből ki kell küszöbölni. A retardált hatású készítményekhez eddig a fentemlített szennyezésektől bonyolult és költséges eljárásokkal nagyrészben megtisztított és kipreparált szilárd anyagot használtak fel. A találmány értelmében nyers ACTH-ból kiindulva egyszerű módon szennyezésektől nagymértékben mentes igen jó hatású injiciálható készítményt állíthatunk elő. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a hátsólebeny és az anafilaxiás szennyezéseket tartalmazó nyers ACTH savanyú vizes oldatát készítjük el, melyhez azután cinksót adunk és alacsony hőmérsékleten az oldatot hosszabb ideig állni hagyjuk, amikor is anafilaxiás hatású .fehérje-csapadék- válik le. Ezt elkülönítjük, célszerűen röpítessél. A hátsólebeny szenynyezést ezután vagy hősterilizálással küszöböljük ki, amikor is injiciálásra alkalmas, kellő tisztaságú oldatot kapunk. A hátsólebeny szenynyezés kiküszöbölésére eljárhatunk úgy is, hogy az oldatból a tiszta ÁCTH-t adszorpciós módszerrel például 142 919 számú szabadalmunkban ismertetett eljárással választjuk le. A nyers ACTH-t célszerűen 0,8—1,5 pH értékre savanyított vízben oldjuk. Savanyításhoz előnyösen sósavat alkalmazunk. Cinksóként előnyösen cinkkloridot alkalmazunk, használhatunk azonban cinkacetátot vagy cinkszulfátot. Célszerűen ml-enként 10—20 mg ACTH-oldatot használunk, amelyhez mi-ként 5—10 mg cinkkloridot adagoltunk. Az eljárással készült tisztított ACTH végtermékek legalább 3—5-ször gyengébb anafilaxiás hatással rendelkeznek, mint a kiindulási nyers ACTH és a hátsólebeny szennyezés is legelébb 2—3-szor kisebb, úgyhogy ezek retardált hatású készítményekhez használhatók. Az eljárás során előálló ACTH-aktivítás veszteség mindössze 25—30%. Az eddig ismert tisztítási eljárásoknál az ACTH-t a szennyezésektől csak lényegesen nagyobb ACTH vesztességek árán, vagy a jelen eljárásnál adódó veszteségek mellett de lényegesen bonyolultabb módon tudták csak megtisztítani. Példa: 1. 100 mg nyers ACTH-t és 40 mg cinkkloridot 10 ml 1/5 n HCl-ben oldunk melegítései. Az oldatot ezután lehűtjük és 0—6 C° közötti hőmérsékleten 72 órán át állni hagyjuk. A levált fehérjetartalmú csapadékot lecentrifugáljuk. A tiszta oldatot elkülönítjük és 100 C°-on 30 percig sterilizáljuk. A lehűtött oldatot 1 n NaOH oldattal pH=3,0 értékre állítjuk be. 10 ml oldathoz 2 mg metriolatot adunk és az. így előkészített oldatot sterilen ampullázz.uk. Eljárhatunk úgy is, hogy az anafilaxiás csapadéktól elkülönített tiszta oldatot ampullázzuk, majd ampullákban sterilizáljuk. A fenti módon kapott steril oldatokat az injiciálás előtt ismert módon megfelelően közömbösítjük. A tisztított végtermék minőségi adatai: ACTH aktivitás E/mg 2,0 2,6* (timusz atrofiás teszt alapján) Hátsólebeny szennyezés 0,12 0,05 (antidiuretikus E/ÁCTH E) Anafilaxiás küszöbérték 2,5 E/kg 16,0 E/kg Kitermelés egységszám alapján a kiindulási anyaghoz viszonyítva 71% Levált inaktív frakció mennyisége 21% *N-tartalom alapján meghatározva. 2. 10 g nyers ACTH-t 400 ml n/10 HCl-ben oldunk kh. 60 C°-ra való gyors melegítéssel. Lehűtés után 15% cinkkloridot tartalmazó 1/2 n HCl-ből adunk hozzá 100 ml-t. Az oldatot azután 48 óráig állni hagyjuk, centrifugáljuk és a
