144046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás fungicidin tisztítására

Megjelent: 1958. július hó 1-én. ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS 144.046. SZÁM 30. h. 1—8. OSZTÁLY — GO—529. ALAPSZÁM Eljárás fungicidin tisztítására A magyar állam, mint a Gyógyszeripari Kutató intézet jogutódja Feltalálók: dr. Bodánszky Miklós és dr. Weisz Erzsébet. Bejelentés napja: 1956. június 21. A Streptomyces noursei által termelt egyik antibiotikum a fungicidin, más néven nystatin elsősorban pathogen és nem pathogen gombák ellen hat. E gombaellenes antibiotikum előállítására és erjesztéses oldatból való elkülönítésére vonatkozóan az irodalomban több adat áll rendelkezésre. (Elisabeth L. Hazen and Rachel Brown: Proc. Soc. Exp. Biol. 76. 93/1951.) Brit. Pat. 714, 189, Rachel Brown, Elisabeth Hazen and Alice, Mason: Science 117, 609/1953.), James D. Dutcher, Gerald Boyack and Sidney Fox: Antibiotics Annual 1953—1954. p. 191.). Az idézett helyeken a fungicidin tisztítására több módszert találunk, így az aktív anyagnak a myceliumról metanollal való leoldását és a metanolos oldatból etilacettátal töfcténő kicsapását; más helyen a szűrt erjesztéses oldatból butanollal történő kivonás útján való tisztításról olvashatunk, Utóbbi módszer elég nehézkesen "vihető keresztül, mert aránylag nagy oldószermennyiség szükséges és a butanol oldat alacsony hőmérsékleten történő besűrítése az iparban számottevő feladatot jelent. Magasabb hőmérsékleten viszont káros bomlás észlelhető. Tekintettel a fungicidin gyógyászati lehetőségére, érdekesnek látszott újabb elkülönítési módszerek után kutatni. Kísérleteink során azt találtuk, hogy a fungicidin számos , adszorbensen megköthető. így aktív szénen, fullerföldön, florizílen (Floridni Co.) alumíniumoxidon, stb. Azonban ezekről az adszorbensekről nem sikerült az antibiotikumot számottevő mértékben leoldani. A felsorolt adszorbensek közül egyedül a florizilről lehetett a megkötött aktivitás egyharmad részét eluálni. Ezen meddő kísérletek után meglepő módon azt észleltük, hogy a Duolit S. 30 és még inkább az Amberlite IRC. 50 kereskedelmi elnevezésű gyanták —, amelyek közül az előbbi adszorbens gyanta, az utóbbi pedig carboxyl-típusú kationcserélő —, képesek a fungicidin megkötésére és róluk az antibiotikum a!koholokkal, elsősorban metanollal leoldható. Mini a megkötés, mind pedig a leoldás az adszorbensnek és a folyadéknak egyszerű öszszekeverésével is elvégezhető, célszerű azonban a műveleteket gyantaoszlop segítségével lefolytatni. A megkötés gyakorlatilag, kvantitatív és a leoldás is igen jó termeléssel vihető keresztül. A fungicidin ilyen adszorpciós elkülönítése és az adszorbensről való visszanyerése az antibiotikum tiszta vizes oldataival és erjesztéses oldataival egyaránt megvalósítható, utóbbi esetben a két művelet nagyfokú tisztítással jár együtt. Egyik kísérletünkben az eluálás után az antibiotikum több mint 40-szeres tisztaságban volt jelen, mint a kiindulási oldatban. 1. példa. Amberlite. IRC. 50 gyantából, melyet előzetesen hidrogén ciklusba hoztunk, készítettünk egy 63 mm magas 8 mm átmérőjű oszlopot. (Oszloptérfogat kb. 3 ml). A gyantaoszlopot ezután desztillált vízzel addig mostuk, míg az átfolyó víz pH-ja 4-re állt be (a pH értéket Merck Universal indikátor papírral ellenőriztük). Az így előkészített oszlopra 95 ml biológiai értékmérés alapján 223y/ml koncentrációjú vizes nystatin oldatot vittünk fel 1 ml/ perc átfolyási sebességgel. A biológiai értékmérés alapján azt láttuk, hogy ilyen körülmények között az aktív anyag 100%ban megkötődött a gyantán. Az oszlopot ezután 20 ml vízzel megmostuk. A mosófolyadékban aktív anyag nem volt kimutatható. Ezután 95 ml metanollal eluáltuk, átfolyási sebesség 1 ml volt percenként. Az eluatumokat 4 frakcióra bontva vizsgáltattuk biológiai értékméréssel. Az első és második frakcióban leoldódott a megkötött aktivitás 80%-a, 17,3 mg nystatin. A 3. és 4. frakcióban még megtalálható volt további 20% aktív anyag, 4,3 mg. Oszlopra felvittünk 21,4 mg nystatint. Eluálás után kaptunk 21,6 mg nystatint. Visszanyerés 100%. 2. példa. Duolit S. 30 adszorptiv gyanta alkalmazása esetén az 1. példában említett kísérlet megfelelőjét végeztük el vizes oldatban. Az alkalmazott oszlop